作者：邬建敏; 奚凤娜; 叶庆富cry1ab表达产物转bt基因植物纯化方法转bt基因水稻阴离子交换色谱制备疏水作用色谱纯化倍数生物信息学捕获效果bt蛋白组合方法fast层析分离flow疏水层析活性影响kscn
摘要：以转Bt基因水稻为试材,研究其表达产物Cry1Ab蛋白的提取、分离及纯化的方法.实验结果表明,DEAE-纤维素填料对Bt 蛋白有较好捕获效果.根据生物信息学方法预测了目标蛋白和主要共存蛋白的等电点和疏水性差异.合理地选择了阴离子交换色谱与疏水作用色谱组合方法.提取液经DEAE-Sephadex A-50柱层析及Phenyl-Sepharose Fast Flow 疏水层析分离后,目标蛋白得到了显著的纯化.考察了疏水层析中用不同洗脱液洗脱Cry1Ab蛋白对活性回收率和纯度的影响,结果表明:以0.25 mol/L KSCN作洗脱液对活性影响最小,HIC一步纯化倍数可达8倍,总纯化倍数达100倍.
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