作者：吴志贤; 曾达武; 林苏; 朱月永; 刘豫瑞慢病毒属rna小分子干扰癌肝细胞丝裂原活化蛋白激酶3
摘要：目的构建慢病毒表达载体介导siRNA沉默Id-1,观察其对人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其对ERK1/2信号通路的影响。方法构建合成特异性针对Id-1基因的siRNA慢病毒载体,转染肝癌HepG2细胞系,经半定量RT-PCR鉴定筛选沉默效果最佳的细胞系,于倒置荧光显微镜（×400）下观察转染前后细胞的形态学变化。取细胞浓度为5×10^6 mL-1的干扰效率最佳的稳定转染细胞系、稳定转染空载体病毒细胞系及正常HepG2细胞系悬液各0.2mL,分别注射到转染实验组、阴性对照组及空白对照组的裸鼠右腋皮下,每周测量肿瘤体积及裸鼠体质量,绘制肿瘤生长曲线,28d后处死裸鼠,制作肿瘤组织标本,行常规病理检查,采用半定量RT-PCR及Western-blot方法检测肿瘤组织Id-1,ERK1/2的mRNA和蛋白的表达水平及p-ERK1/2的蛋白表达水平。结果倒置荧光显微镜显示,转染前后细胞形态学变化不明显。经半定量RT-PCR筛选出Id-1基因的siRNA慢病毒载体的最佳细胞系为sh31,与稳定转染空载体病毒细胞系相比,目的基因Id-1的表达降低了80%以上,与未干扰的HepG2细胞相比降低了60%;转染细胞皮下接种后,转染组最终瘤体大小明显小于阴性对照组和空白对照组（P〈0.05）。半定量RT-PCR显示,转染组肿瘤组织的Id-1及ERK1/2 mRNA分别为（0.389±0.058）及（0.475±0.079）,均明显低于阴性对照组[（0.845±0.113）,（0.977±0.082）]和空白对照组[（0.917±0.083）,（0.978±0.056）]（均为P〈0.05）。Western-blot检测显示,转染组的Id-1及p-ERK1/2蛋白均明显低于阴性对照组和空白对照组（P〈0.05）。结论 Id-1基因特异性siRNA的慢病毒表达载体通过靶向抑制Id-1的表达,明显抑制人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤的生长,推测Id-1可能通过调节ERK1/2 MAPK信号通路参与肝癌的发生发展。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
