作者：周芳; 吴瑜瑜细胞培养技术小梁网青光眼骨形态发生蛋白质类细胞增殖
摘要：目的建立原发性开角型青光眼（POAG）小梁网细胞体外原代培养体系;分析不同终浓度重组人骨形态发生蛋白7（rhBMP7）对POAG小梁网细胞增殖的影响;探讨rhBMP7与POAG发生、进展的相关性。方法取术中切除的带小梁网组织块（未使用丝裂霉素C）,进行体外原代及传代培养,取3代小梁网细胞,在CFDA SE标记后,分别加入终浓度为0（对照组）,20,50,80,100,200ng/mL的rhBMP7无血清培养基,采用CCK8、荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测POAG小梁网细胞增殖情况。结果细胞经传代培养,经鉴定为POAG小梁网细胞;采用CCK8法检测发现：经终浓度为0（对照组）,20,50,80,100,200ng/mL的rhBMP7处理后,POAG小梁网细胞吸光度（OD值）分别为：（0.561 2±0.026 9）,（0.724 2±0.039 3）,（1.416 0±0.016 2）,（1.740 4±0.039 2）,（1.853 8±0.014 5）,（1.936 4±0.054 6）;实验组细胞增殖率分别为1.37%,2.96%,3.70%,3.96%,4.15%;实验组与对照组及各实验组间增殖率比较,差别具有统计学意义（P〈0.05）;荧光显微镜示：随着rhBMP7终浓度的增加,经CFDA SE标记的POAG小梁网细胞荧光染色变浅、细胞量及密度增加;采用流式细胞仪检测经20,50,80,100,200ng/mL终浓度rhBMP7干预的POAG患者小梁网细胞,分裂、增殖细胞所占的比例分别为17.85%,18.63%,20.10%,27.45%,72.41%。结论运用组织块培养法,可体外原代培养出POAG患者的小梁网细胞;rhBMP7在一定程度上可促进POAG小梁网细胞的增殖,且在一定范围内呈剂量依赖性。
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