作者：刘杰 包莹玲 陈小龙吸水链霉菌井冈霉素a穿梭质粒
摘要：为提高井冈霉素A的产量,本实验尝试构建吸水链霉菌的多拷贝基因菌株.根据吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus subsp.jinggangensis）的糖基转移酶基因（valG）序列设计了1对引物.PCR扩增编码糖基转移酶（ValG）的1269 bp基因后,利用TA克隆构建克隆质粒pMD-19-valG.测序正确后经双酶切构建穿梭质粒pIJ8630-valG.再次测序验证后,经质粒DNA转化吸水链霉菌感受态细胞将pIJ8630-valG导入吸水链霉菌中.PCR检测证实重组菌构建成功.HPLC检测发酵产物,发现井冈霉素A的产量达到了1.17 mg/mL,比出发菌株提高了11.2％,valG基因得到表达,为进一步利用valG构建新的高产菌株奠定了基础.
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