作者：孙燕勇; 高民; 徐明; 宋利文; 李洋; 李超...亚急性瘤胃酸中毒奶山羊瘤胃上皮组胺脂多糖尤斯灌流仪器紧密连接蛋白
摘要：本试验旨在采用体外法研究p H与脂多糖（LPS）或组胺（HIS）的交互作用对奶山羊瘤胃上皮细胞紧密连接蛋白mRNA表达量的影响。选用8只体况良好,体重、泌乳量相近的萨能奶山羊作为瘤胃上皮供体。采用3×3双因素试验设计,山羊屠宰后采集瘤胃上皮,插入到尤斯灌流仪器（Ussing chamber）半室中央,在浆膜侧半室加入5 m L缓冲液,黏膜侧加入配制好的不同处理的培养液5 m L,每个处理3个重复。试验1：因素1为p H,分别为7.4、5.5、5.2;因素2为LPS浓度,分别为0、30、60 k EU/m L。试验2：因素1为p H,分别为7.4、5.5、5.2;因素2为HIS浓度,分别为0、0.5、10.0 ng/m L。采集培养80 min后的瘤胃上皮,测定其紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-4、Claudin-7、Occludin、zonula occludens-1（ZO-1）mRNA表达量。结果显示：1）p H与LPS的交互作用对Claudin-1、Claudin-7、ZO-1 mRNA表达量影响显著（P〈0.05）。与p H 7.4×0 k EU/m L LPS组相比,降低p H或添加LPS均显著降低了Claudin-1、Claudin-7 mRNA表达量（P〈0.05）,ZO-1 mRNA表达量有整体降低的趋势,在p H 5.2×60 k EU/m L LPS组最高。2）p H与HIS的交互作用对Claudin-1、Claudin-7、ZO-1 mRNA表达量影响显著（P〈0.05）。p H 5.5×0.5 ng/m L HIS组Claudin-1 mRNA表达量最低,但与p H 5.2×0.5 ng/m L HIS组差异不显著（P〉0.05）。p H 7.4×10.0 ng/m L HIS组Claudin-7 mRNA表达量显著低于p H 7.4×0 ng/m L HIS组（P〈0.05）,但与p H 5.5×10.0 ng/m L HIS组差异不显著（P〉0.05）。与p H 7.4×0 ng/m L HIS组相比,降低p H或添加LPS有提高ZO-1 mRNA表达量的趋势,且p H 5.2×10.0 ng/m L HIS组显著提高（P〈0.05）。结果提示,亚急性瘤胃酸中毒（SARA）发生后,p H与LPS或HIS交互作用于瘤胃上皮,降低瘤胃上皮紧密连接蛋白mRNA表达量,进而增大瘤胃上皮黏膜通透性。
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