作者：成璐; 张冬星; 吴娟; 李影布鲁菌原核表达多克隆抗体
摘要：为制备布鲁菌(Brucella)L7/L12蛋白及其小鼠源多克隆抗体,根据猪布鲁菌(Brucellasuis)S2株L7/L12基因序列,设计合成特异性引物,PCR扩增L7/L12基因并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a-L7/L12,经鉴定正确后转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,重组菌经IPTG诱导后成功表达出分子质量为17ku的重组蛋白。将诱导表达的蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其抗体效价。Westernblot结果表明,原核表达后纯化的L7/L12蛋白能够与制得的小鼠抗L7/L12蛋白多克隆抗体特异性结合。成功获得了纯化的L7/L12重组蛋白和小鼠抗L7/L12多克隆抗体,为进一步研究L7/L12蛋白对布鲁菌感染的诊断方法和基因工程疫苗的研发奠定了基础。
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