作者：金婷婷; 曲光刚; 王长江; 武曰星; 唐世云...犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子原核表达免疫印迹
摘要：为筛选犬新孢子虫保护性抗原，克隆表达犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子（MIF）并对其免疫原性进行分析。根据GenBank公布的犬新孢子虫MIF（NcMIF）序列，利用分子生物学软件设计2套特异性引物，以NcMIFmRNA反转录产物为模版，采用PCR扩增出NcMIF基因和2种突变基因NcMIFm和Nc—MIFhis，选用原核表达载体pET26b，分别构建重组质粒pET26b—NcMIF和pET26b—NcMIFm。重组质粒分别转入E．coliBL21（DE3）中进行表达，纯化后的蛋白利用免疫印迹法进行鉴定。结果显示，rNcMIF和rNcMIFm这2种重组蛋白在BL21（DE3）表达菌株中均为可溶性表达，诱导表达最佳条件为30℃诱导3hIPTG诱导浓度为1mmol／L；Westernblot分析结果表明，该表达产物能与抗rNcMIF绵羊血清发生反应，说明获得的蛋白具有较好的抗原性和特异性。
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