作者：张芳芳; 刘光亮; 姜永萍; 陈化兰; 陈怀涛禽流感病毒h5ha基因h7ha基因基因表达核酸疫苗质粒间接免疫荧光
摘要：为了获得既能对H5亚型又能对H7亚型AIV攻击产生保护的核酸疫苗,设计构建了含有双顺反子的真核表达载体,用限制性内切酶从PCIH7HA载体上切得AIV H7HA基因的cDNA,此cDNA含有CMV启动子和Poly(A)终止序列,使用DNA连接酶引入载体PCIH5HA中,最后获得双顺反子真核表达载体PCI-H5HA-H7HA,其中H5HA和H7HA基因都带有自己的CMV启动子和Poly(A)终止序列.选用293-T真核表达细胞系,用脂质体转染法导入细胞进行瞬时表达,转染后48 h用荧光标记的兔抗鸡IgG进行间接免疫荧光试验.结果表明双顺反子真核表达载体构建正确,且在真核表达细胞系中H5HA和H7HA基因都能获得表达,且H5HA基因的表达效果优于H7HA.这为进一步的动物免疫试验和疫苗效价检测试验奠定了基础.
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