作者：刘建; 徐晓荣; 李云霞; 李慧鹏; 高原; 李...豹猫成纤维细胞细胞生长曲线冷冻存活率核型
摘要：研究体外培养豹猫（Prionailurus bengalensis）细胞的形态、细胞贴壁率、冷冻存活率、生长曲线及细胞核型等生物学特性,为深入开展豹猫基因组学及濒危野生动物保护提供依据。本实验选择豹猫3种组织,即剑状软骨、心和肺,采用组织块贴壁培养法进行体细胞的原代培养;酶消化法完成细胞的传代培养;程序降温完成细胞的冷冻保存;通过细胞计数法计数细胞冷冻存活率;绘制细胞生长曲线;采用常规染色体标本制备技术,对豹猫的染色体核型及G带进行分析。细胞原代培养结果显示,剑状软骨组织在培养第3天出现纤维样细胞、培养6～7 d铺满培养瓶;心组织在培养第5天出现上皮样细胞、12 d铺满培养瓶;肺组织在培养4 d后出现成纤维细胞、8～9 d铺满培养瓶。3种来源体细胞均显示成纤维细胞特征,剑状软骨源细胞最易贴壁、肺源细胞次之、心源细胞最弱。对比3种不同来源体细胞从6代（P6）至12代（P12）冷冻存活率,剑状软骨源细胞冷冻存活率显著下降（冻存前91.0%～97.6%,冻存后76.8%～85.5%,P〈0.05）,心源细胞冷冻存活率亦显著下降（冻存前82.7%～88.1%,冻存后43.7%～80.5%,P〈0.05）,肺源细胞冷冻存活率有下降趋势,但无显著差异（冻存前83.4%～96.8%,冻存后73.9%～93.3%,P〉0.05）。生长曲线分析显示,3种体细胞均呈＂S＂型,其中剑状软骨源细胞增殖最快、肺源细胞次之、心源细胞最慢。核型分析结果显示,3种不同来源的成纤维体细胞染色体数目均为2n=38,18对为常染色体,形态类型为6m＋10sm＋2st,1对为性染色体,X染色体形态类型为m。本研究建立了3种组织来源的豹猫成纤维细胞建系技术及体细胞系,揭示了该物种成纤维细胞的基本生物学特性,为动物遗传信息研究及豹猫保护提供了重要的实验材料和基础信息。
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