作者：肖俊; 许亮清; 胡向萍; 程周玉; 胡宝庆; ...铜锌超氧化物歧化酶原核表达蛋白特性
摘要：超氧化物歧化酶（SOD）是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶。根据翘嘴鳜（Siniperca chuatsi）Cu/Zn-SOD基因序列（Gen Bank登录号：KJ558392.1）设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了重组表达质粒p ET-30a＋Sc Cu/Zn-SOD,并将该质粒转入到BL21（DE3）中,用IPTG诱导进行表达。经过优化表达条件得到可溶的Sc Cu/Zn-SOD重组蛋白（rScCu/Zn-SOD）,纯化重组蛋白后测定rScCu/Zn-SOD的浓度和酶活性。结果发现在20℃和37℃条件下均能够诱导Sc Cu/ZnSOD的表达。37℃时重组蛋白主要以包涵体形式存在。降低诱导温度和补充Cu（2＋）/Zn（2＋）可提高rScCu/Zn-SOD的表达量。在20℃、0.5 mmol/L IPTG条件下,添加0.5 mmol/L CuSO4和0.1 mmol/L ZnCl2于培养基中,重组蛋白的表达量明显升高。纯化后的重组蛋白浓度为0.14 mg/m L,酶活力为108.5 U/mg。rScCu/Zn-SOD最适温度为37℃,最适pH为7.0,可耐受5%浓度的SDS蛋白质变性剂。
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