作者：熊强; 邓玉华; 张祯祯; 张明满; 李英存; ...肝硬化生物支架细胞外基质
摘要：目的通过理化方法制备人源性肝硬化组织细胞外基质(extracelluar matrix,ECM)生物支架,并利用肝硬化组织ECM对人原代肝细胞(primary human hepatocytes,PHH)进行立体培养,建立以肝硬化组织ECM为基础的细胞立体培养平台。方法收集肝移植患者移除的硬化肝脏,肝素生理盐水灌洗去除血细胞,将肝脏切割成125 mm~3组织块。依次将组织块置于超纯水、去污剂中反复振荡,破坏细胞膜、DNA及免疫源性物质,制备出肝硬化组织ECM。采用悬滴法将PHH植入ECM进行细胞培养,连续培养9 d后,组织学检测PHH植入生物支架情况。qPCR比较离体培养及平面培养模型下肝细胞的特异性基因表达差异。结果去除细胞的肝硬化组织呈无色透明,HE染色及扫描电镜未发现残留细胞核,残余DNA鉴定显示DNA残留约为10 ng/mg,提示该法成功去除肝硬化组织原有细胞及基因组DNA。将人PHH接种入人源性肝硬化组织ECM,连续培养9 d后,HE染色发现PHH能够植入人源性肝硬化组织ECM中并生长良好,立体培养条件下,PHH特异性基因表达水平明显高于传统平面培养。结论本研究利用人源性肝硬化组织成功制备无细胞ECM生物支架,并证实其在细胞立体培养的可行性。
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