作者：陈霞; 肖煦动脉硬化斑块超声微泡血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1sirna
摘要：目的构建载血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1，LOX-1）-siRNA靶向超声微泡，研究其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用。方法薄膜水化-超声乳化法构建载LOX1-siRNA纳米级超声微泡（nanobubbles, NBssiRNA）。从Wistar大鼠体内分离、培养动脉平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）。通过凝胶迁移阻滞实验与siRNA细胞内化实验验证超声微泡可运载siRNA进入靶细胞内；qRT-PCR及Western blot检测LOX1的mRNA和蛋白表达水平；油红O染色观察细胞内脂质聚集情况。构建Wistar大鼠动脉硬化模型，实验组经鼠尾静脉注射含有LOX-1-siRNA的NBs-siRNA微泡100 μg，并使用超声仪照射。治疗15 d后，取标本HE染色后与对照组对比动脉硬化斑块病变程度；免疫组化法检测斑块组织中LOX-1表达情况。结果凝胶迁移阻滞实验结果显示，证实NBs与siRNA结合成功。激光共聚焦显微镜观察证实NBs可通过超声照射介导siRNA内化入VSMCs之中。qRT-PCR及Western blot实验结果显示实验组VSMCs LOX-1 mRNA及蛋白表达水平降低（P〈0.01）。油红O染色显示实验组细胞泡沫化较oxLDL组减弱。组织标本HE染色表明实验组大鼠动脉斑块病变中内膜增厚、中膜萎缩及炎细胞浸润情况较对照组减轻；免疫组化实验结果显示，实验组动脉斑块中LOX-1表达水平较各对照组降低（P〈0.01）。结论成功制备能够有效运载LOX-1-siRNA的超声微泡，体内外实验证实该微泡可以在超声辐照下内化入靶细胞内部，下调LOX-1表达，减少泡沫细胞形成，降低动脉硬化斑块病变的严重程度。
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