作者：陈施翰; 邓青松; 蒋家云; 邹孟达; 谭运华...肝癌细胞凋亡长链非编码rna亚致死性热温度hsp72
摘要：目的 探讨46~50℃时抑制重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）蛋白促肝癌细胞凋亡相关分子机制。方法 建立肝癌细胞亚致死性热温度模型,在不同温度（43、46、50℃）条件下分别处理10 min,Annexin-V/PI染色检测重组人TRAIL蛋白对肝癌细胞凋亡率的影响,以常温37℃作为对照组。根据前期肝癌细胞Agilent Human lnc RNA＋mRNA Array V4.0芯片表达谱数据,选定50℃时特异性高表达的LncRNA RNU12作为研究对象。构建LncRNA RNU12-sh RNA慢病毒干扰载体,转染MHCC97-H细胞。qRT-PCR及Western blot检测感染前后不同温度组中热休克蛋白72（heat shock protein 72,HSP72）mRNA和蛋白的表达变化。利用流式细胞技术检测LncRNA RNU12慢病毒干扰载体对TRAIL蛋白诱导细胞凋亡的影响。采用荧光原位杂交（FISH）技术检测LncRNA RNU12亚细胞定位情况。结果 温度在43℃时促进重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能,46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能。HSP72 mRNA在4个温度组中的表达均较干扰前明显降低（P〈0.01）;在蛋白水平,37、46、50℃组较干扰前显著降低（P〈0.05）。转染后,46、50℃条件下TRAIL蛋白诱导MHCC97-H细胞凋亡分别上升7.36%、8.84%（P〈0.01）。利用RNA-FISH技术确定50℃时LncRNA RNU12主要在MHCC97-H细胞细胞核中表达。结论 LncRNA RNU12在转录水平上调HSP72表达可能是46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白促肝癌细胞凋亡分子机制之一。
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