作者：许治国; 朱江; 党晓洁; 任梅凋亡信号调节激酶1视网膜神经节细胞小干扰rna
摘要：目的 研究细胞凋亡信号调节激酶1（apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1）对高糖诱导的视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）损伤的保护作用及其可能的机制。方法 建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖（50 mmol/L葡萄糖）损伤模型。转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性。结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显（P〈0.05）;ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升（P〈0.05）;ASK1 siRNA的转染实验结果显示：ASK1的表达水平明显下降（P〈0.05）,说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力（P〈0.05）和增殖能力（P〈0.05）明显上升,RGC的凋亡（P〈0.01）和Caspase-3的活力（P〈0.01）明显降低。沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平。结论 抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关。
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