作者：杜先智; 周向东elafin腺病毒气道上皮细胞
摘要：目的构建天然抗菌多肽elafin基因高效表达载体——重组腺病毒载体，并探讨其在肺上皮细胞中的初步表达。方法提取人肺总RNA，进行elafin基因逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）扩增，PCR产物双酶切后亚克隆至穿梭质粒pAdTrack—CMV上；在BJ5183细菌内和pAdEasy-1同源重组，筛选阳性克隆，酶切、PCR及测序鉴定，PacⅠ酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装，获得腺病毒载体Ad—elafin；继之在293细胞内扩增，利用报告基因荧光蛋白（GFP）监测病毒滴度和感染效率；重组腺病毒Ad—elafin转染原代培养的气道上皮细胞，24h后荧光显微镜观察GFP表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测培养上清液中elafin的含量。结果测序、酶切及PCR证实天然抗菌多肽elafin基因重组腺病毒载体Ad-elafin构建成功，同时转染气道上皮细胞24h后荧光显微镜可见GFP的表达，且转染组细胞上清液中elafin测定值为（2．4±0．4）ng／ml与对照组（1．9±0．3）ng／ml相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论elafin基因重组腺病毒载体成功构建，有利于elafin生物特性的研究。
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