作者：张椿; 丛延广; 胡福泉; 饶贤才肽抗生素发酵m15
摘要：目的 通过重新构建新的3拷贝串联体基因工程菌phPAB-β（3）／M15，在原有肽抗生素hPAB-β制备工艺路线基础上，使发酵后目的肽的最终产量得到提高。方法 重新构建含有重组质粒pQE31-hPAB-β（3）的基因工程菌M15，然后筛选出能够稳定而且高效表达目标蛋白的最佳工程菌株，进行传代稳定性分析，并明确新建工程菌中目标融合蛋白的表达形式和亲和层析的效果，最后通过相同条件下，在逐步放大的发酵规模（1 L摇瓶，3．7 L和10 L发酵罐），与以往的3拷贝串联体工程菌phPAB-β（3）／JM109进行对比研究（湿菌产量、目标蛋白表达率），同时观察新建工程菌在10L发酵中目标蛋白的表达和遗传稳定性。结果 筛选出的最佳工程菌株的目标蛋白的表达效率为34．8％，经LB培养传代10次后，点种LB（AMP、KAN）平板，生长率为100％，质粒保存率达100％。在1L摇瓶，3．7L和10L发酵罐的发酵规模下，phPAB-β（3）／M15与phPAB-β（3）／JM109一样，目标融合蛋白都以包涵体形式表达，亲和层析效果相近，目标蛋白表达率无显著性差异（P〉0．05），但发酵产量大于后者，有非常显著性差异（P〈0．01）。且新建工程菌在10L发酵中发酵产量达到55．15g/L，诱导表达后的第5小时，蛋白表达达到高峰，蛋白表达率为30．2％，重组质粒保存率为100％。结论 新构建工程菌phPAB-β（3）／M15比起原来基因工程菌phPAB-β（3）／JM109，是更为理想且利于肽抗生素hPAB—β工业生产的基因工程菌。
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