作者：张勤; 张遵真; 衡正昌g1特异性鉴定hogg1基因cdna琼脂糖凝胶电泳锤头状核酶基因dna测序保守序列计算机软件基因克隆人工合成基因序列靶基因酶切糖苷酶重组子克隆人设计准确位点
摘要：目的设计并合成人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体.鉴定含有核酶靶基因HOGG1 cDNA保守序列的真核表达载体.方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3.1中,重组子由BamH I和EcoR I酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实.含有HOGG1基因cDNA保守序列的真核表达载体经BamHI和EcoRI酶切电泳鉴定.结果RZ人工合成后与pcDNA 3.1连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3.1的BamH I和EcoR I位点之间,命名为pcDNA 3.1-RZ.1.3kb的HOGG1基因cDNA保守序列准确克隆于pcDNA 3.1的BamH I和EcoR I酶切位点之间,命名为pcDNA 3.1-HOGG1.结论成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的真核表达载体.
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