作者：刘志勇; 李林林; 刘善荣肝细胞癌蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶akt蛋白激酶抑制剂细胞凋亡
摘要：目的观察不同药物浓度和作用时间下蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶AKT抑制剂GSK2141795对人肝癌细胞株Huh7凋亡的影响及其剂量和时间效应。方法 分别使用终浓度为0、0.3、1、3、10、30μmol/L的GSK2141795处理Huh7细胞24 h,同时选择终浓度为10μmol/L的GSK2141795分别处理Huh7细胞0、2、6、12、24和48 h。利用蛋白质印迹法检测Huh7细胞中AKT、磷酸化AKTS473(p-AKTS473)的蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qPCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中凋亡相关分子Bad、Bcl-2、Caspase-9的表达水平。结果 蛋白质印迹分析结果显示,在0~10μmol/L范围内,随着GSK2141795终浓度的增加,Huh7细胞中AKT蛋白表达水平逐渐降低,p-AKTS473蛋白表达水平逐渐升高;在0~24 h范围内,随着GSK2141795作用时间的延长,Huh7细胞中AKT蛋白的表达水平呈降低趋势、p-AKTS473蛋白的表达水平呈升高趋势;48 h时AKT蛋白和p-AKTS473蛋白的表达水平较0 h均升高。流式细胞术检测结果显示,随着GSK2141795浓度的增加和作用时间的延长,Huh7细胞的凋亡比例逐渐增加。qPCR及蛋白质印迹分析结果提示Huh7细胞中凋亡效应分子Bad、Caspase-9表达水平逐渐增加,凋亡拮抗分子Bcl-2表达水平逐渐降低。结论 AKT抑制剂GSK2141795能有效抑制AKT蛋白表达,并能通过下游Bad-Bcl-2通路诱导Huh7细胞凋亡,其药物效应呈一定的浓度和时间依赖性。此外,长时间使用GSK2141795刺激Huh7细胞,AKT蛋白表达可再次升高,提示存在负反馈信号环路。
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