作者：杨再立; 赵凡凡; 王刚; 龙钢丙型肝炎病毒载脂蛋白e绿色荧光蛋白质类细胞系
摘要：目的 探讨表达载脂蛋白E-增强型绿色荧光蛋白（apolipoprotein E-enhanced green fluorescence protein,apoEEGFP）的细胞系是否支持感染性丙型肝炎病毒（HCV）颗粒的组装。方法 利用shRNA基因沉默技术建立apoE稳定下调的Huh7.5.1细胞系,然后通过基因工程技术在该细胞系中建立稳定表达apoE-EGFP融合蛋白的细胞系。将HCV RNA转染进入野生型细胞（Huh7.5.1细胞）、对照组sh-NT细胞（转导非靶向野生型细胞基因的shRNA质粒的细胞）、apoE下调的Huh7.5.1细胞（sh-apoE细胞）以及表达apoE-EGFP融合蛋白的sh-apoE细胞（apoE-EGFP细胞）中,收集病毒液;通过半数组织培养感染剂量（TCID50）方法检测释放到Huh7.5.1、sh-NT、sh-apoE和apoE-EGFP细胞培养上清液中的HCV的滴度。利用免疫荧光技术检测apoE与HCV的结构蛋白E2的相互作用,利用蛋白质印迹法检测用具有特异亲和性FLAG-gel纯化的HCV颗粒表面的apoE-EGFP的表达。结果 apoE-EGFP融合蛋白在apoE-EGFP细胞系中高效表达;apoE-EGFP细胞来源的HCV的感染性与Huh7.5.1、sh-NT细胞相比差异无统计意义;在apoE-EGFP细胞系中,apoE-EGFP融合蛋白与HCV结构蛋白E2存在共定位,并且可以在HCV颗粒表面上检测到apoE-EGFP融合蛋白。结论 apoE-EGFP融合蛋白是HCV颗粒的组分,apoE-EGFP细胞系支持感染性HCV颗粒的组装。
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