作者：潘传涌 杨生生 傅海龙 缪明永 焦炳华肝细胞bcl6细胞增殖细胞凋亡
摘要：目的克隆大鼠B细胞淋巴瘤因子6（B-cell lymphoma 6,Bcl6）基因,构建绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Bcl6,初步探讨大鼠Bcl6转录因子在大鼠肝细胞中的生物学作用。方法首先提取大鼠肝脏总RNA,经反转录和巢式PCR扩增Bcl6编码区的CDS序列后,通过基因重组的方法构建pEGFP-Bcl6重组质粒并鉴定;然后利用脂质体转染法将重组质粒转入大鼠肝细胞BRL-3A中,利用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测其表达;最后应用流式细胞术分析转染融合表达质粒后肝细胞的凋亡,采用MTT法检测肝细胞的增殖情况。结果 PCR法和测序法鉴定重组质粒pEGFP-Bcl6构建成功,实时定量PCR法和蛋白质印迹法鉴定重组质粒瞬时转染成功,流式细胞术证实Bcl6具有抑制肝细胞凋亡的作用,MTT法证实Bcl6具有促进肝细胞增殖的作用。结论成功克隆了大鼠Bcl6基因,构建了Bcl6绿色荧光蛋白表达载体,在大鼠肝细胞中初步证明Bcl6具有促进肝细胞增殖和抑制凋亡的作用。
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