作者：罗祥基 程庆保 徐峰 谭蔚锋 姜小清 张柏...psuper载体hbs基因小rna干扰筛选
摘要：目的：利用pSUPER-RNAi载体系统进行HBsRNAi序列的初步筛选和干扰效果鉴定。方法：设计并合成针对HBs基因区的3条siRNA（HBs-siRNAl、HBs-siRNA2、HBs-siRNA3），构建3种重组载体pSUPER-HBs-siRNA，与HBV质粒同时瞬转入胚肾293T细胞，72h后观察转染效果，实时定量PCR和ELISA法鉴定3种干扰序列对HBs的干扰效果，筛选最佳干扰序列。结果：成功构建3种干扰质粒pSUPER-HBs-siRNA，能高效转染人胚肾上皮细胞293T，转染效率在70％以上；实时定量PCR和ELISA法结果均显示HBs-siRNA2可有效抑制HBs的表达，抵制率可达80％，而HBs-siRNA1、HBs-siRNA3干扰效果不显著，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：成功构建3种干扰质粒pSUPER-HBs-siRNA，筛选出其中能有效抑制HBs基因表达的pSUPER-HBs-siRNA2序列，为后续研究奠定了基础。
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