作者：王志强 唐建武 王绍青 孙成荣 王波膜联蛋白a7rna干扰转染肝肿瘤淋巴转移
摘要：目的：建立针对膜联蛋白A7（annexinA7）的shRNA（small hairpin RNA）稳定转染的小鼠肝癌细胞株Hca—F，为后续研究奠定基础。方法：构建3条针对annexin A7的shRNA（shRNA1、2、3），分别与pSilencer连接，构建表达载体并分别转染Hca—F细胞，在mRNA和蛋白质水平比较3条shRNA对annexinA7表达的抑制作用，筛选抑制效果最好的shRNA转染Hca～F。稳转后用含400ug／ml G418的完全培养基筛选，获得annexinA7表达稳定下调的Hea—F细胞株后传代扩增，应用Western印迹法检测Hca—F细胞annexinA7蛋白的表达，并与空载体转染组及正常对照组进行比较。结果：经DNA测序鉴定，所得到干扰序列与GenBank中序列一致；筛选出其中shRNA1对annexinA7的表达抑制效果最好。pSilencer—shRNA1转染Hca—F细胞株后，annexinA7蛋白的表达远低于空载体转染组和正常对照组（0．3186VS0．7987，0．8243，P〈0．05），而后二者间无统计学差异。结论：成功建立了annexinA7表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株，为后续研究奠定了基础。
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