作者：丁庆莉 刘梦蕾 龙宪连 沈茜可诱导共刺激分子重组逆转录病毒载体转染
摘要：目的：构建携带人可诱导共刺激分子（inducible costimulator molecule,ICOS）基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定。方法：RT-PCR法从人PBMC中获取ICOScDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,制备逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS;经病毒包装细胞包装后抗性筛选出产高滴度病毒的细胞株,用高滴度病毒上清感染CHO细胞,抗性筛选出稳定表达细胞株。将CHO-ICOS细胞和PBMC以不同比例（1：1、1：2、1：5、1：10）共培养,加入亚刺激剂量（200ng/ml）的抗人CD3抗体,采用3H-TdR掺入法检测PBMC的增殖,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD25表达情况,并以CHO-pMSCV细胞和PBMC以1：1比例共培养作为阴性对照以及未处理的PBMC作为空白对照。结果：成功构建逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS,筛选出稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株。3H-TdR掺入法和流式细胞仪检测结果表明,与阴性对照及空白对照相比,CHO-ICOS细胞与PBMC共培养能抑制CD3抗体诱导的PBMC增殖及活化（P〈0.05或P〈0.01）,细胞比例为1：1时抑制率最大,分别为（68±5.9）%、（44.08±3.26）%。结论：成功建立具有生物学活性的膜稳定表达人ICOS蛋白的CHO细胞株,为今后研究奠定了基础。
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