作者：吕碧涛; 袁文; 徐盛明; 刘百峰; 曹莉慢病毒nogo受体rna干扰
摘要：目的：构建大鼠Nogo受体（Nogo receptor，NgR）基因RNA干扰慢病毒表达载体，并观察其对293T细胞感染效率。方法：应用基因工程技术，首先构建携带目的基因siNgR199的慢病毒穿梭质粒表达载体，然后使用慢病毒包装质粒混合物和构建好的慢病毒穿梭质粒共转染293T细胞，转染48h后收集上清离心过滤后冰浴保存，最后进行病毒滴度测定，与标准病毒液分别感染293T细胞，按MOI值分为5个梯度：1、3、5、10、20，以确定病毒滴度及适合感染的MOI值。其中采用PCR方法对重组载体进行鉴定，利用绿色荧光蛋白作为报告基因，对病毒滴度和感染效率进行检测。结果：酶切鉴定及PCR结果与病毒载体的预期结果一致，病毒滴度达1×10^8 ifu／ml，适合感染的MOI值为3。结论：应用基因工程技术，成功构建了大鼠siNgRl99慢病毒表达载体，为应用于治疗脊髓损伤后轴突再生创造了条件。
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