作者：张绪峰; 吴国祥; 朱克军; 焦炳华; 成国祥人乳白蛋白yac高效定点打靶修饰酵母人工染色体酵母人工染色庠转移
摘要：目的：对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造，以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究。方法：借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力，把HLA-YAC由酵母AB1380转移到his3缺陷的YPH925菌株。分别以HIS3(对YPH925菌株)和(G418R(对YPH925和AB1380两种菌株)为选择标记，用含HLA-YAC的酵母基因组为模板，PCR克隆人乳白蛋白(HLA)基因的5’和3’端非翻译区各684 bp和940 bp为同源臂，构建打靶载体，线性化的打靶载体经电转化或醋酸锂转化转入酵母内，以菌落PCR为鉴定方法．辅以测序验证。结果：HLA-YAC在目的位置完成了定点打靶修饰，G418R的筛选效率高于HIS3，醋酸锂转化方法的打靶效率稍高于电转化。结论：对YAC的成功修饰为在动物体内的表达及调控研究打下了基础。
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