作者：李雅慧; 黎怀星; 吴丹; 施柯; 蔡东联; 孙...小鼠retn基因sirnas设计载体基因表达脂肪细胞
摘要：目的：设计小鼠Retn基因特异性的siRNAs，并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些siRNAs的表达质粒，以便为在体外研究Retn基因的功能打下基础。方法：(1)设计并合成小鼠Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段，并克隆到pSilencer^HM1．0-Neo载体；(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能稳定表达相应siRNAs的一组3T3-L1细胞克隆；(3)诱导细胞分化为脂肪细胞，并用RT—PCR分析这些脂肪细胞内Retn基因的mRNA水平。结果：设计并构建了4个小鼠Retn基因特异性的siRNAs表达质粒，并证明其中的2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的siRNAs。显著地抑制了这些脂肪细胞内Retn基因的mRNA水平。结论：本研究设计并构建出的小鼠Retn基因特异性的siRNAs表达载体，所表达的siRNAs具有较强的RNA干涉功能，为Retn基因的功能研究奠定了实验基础。
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