作者：颜宏利; 贺燕; 刘凡; 杨湘越; 孙树汉膜联蛋白a5cdna克隆大肠杆菌基因表达
摘要：目的：克隆人膜联蛋白A5 cDNA并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用RT-PCR技术从人胎盘组织的总RNA扩增膜联蛋白A5的cDNA序列，将该基因插入GST融合表达载体pGEX-5T，在tac启动子控制下，IPTG诱导表达GST融合蛋白。以亲合层析法纯化表达的融合蛋白，用KPTT法验证抗凝血活性。结果：凝胶电泳显示PCR扩增产物的长度为978bp，重组质粒测序结果表明，插入片段与人膜联蛋白A5的序列完全一致。在IPTG诱导下，K802重组菌高效表达出相对分子质量为58000的融合蛋白，表达量占菌体总蛋白的26％。纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。结论：成功克隆人膜联蛋白A5基因并在大肠杆菌中高效表达。
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