作者：刘颖; 王显国; 张巨明; 刘芳山野豌豆srappcr体系优化正交设计引物筛选
摘要：采用正交试验设计,以山野豌豆叶片DNA为模板,从Mg2＋、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对山野豌豆SRAP-PCR反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了山野豌豆的SRAP-PCR最佳反应体系。结果表明,山野豌豆SRAP-PCR最佳反应体系为：2μL 10×PCR buffer（不含Mg2＋）、30ng的模板DNA、引物2.0μmol/L、Mg2＋2.0mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、dNTP 0.2mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以引物浓度影响最大,dNTP浓度的影响最小。运用该体系对3份山野豌豆种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从98对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的20对引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为SRAP分子标记技术进行山野豌豆分子遗传学研究奠定了基础。
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