作者:安惠惠; 马晖玲; 李坚; 白生军; 马祥匍匐翦股颖基因转化溶菌酶lyz基因绿色荧光蛋白gfp基因
摘要:以匍匐翦股颖PennA-1成熟胚为供试材料,建立了其植株高效再生体系。利用农杆菌介导法将溶菌酶与绿色荧光蛋白Lyz-GFP双元基因转人匍匐翦股颖PennA-1胚性愈伤组织中,经培养获得抗病转基因植株。并对Lyz-GFP双元基因转化Penn艮1的适宜条件进行了研究。研究结果表明,在2.0mg/L2,4-D+0.1mg/L6-BA的MS培养基上PennA_1愈伤组织诱导率最高,可达36%,且质量最好。愈伤组织在MSO+0.5mg/LNAA上分化率最高,达42.50o;浓度为300mg/L的头孢霉素(Cef)可抑制农杆菌LBA4404的生长;PennA-1胚性愈伤组织经携有pBll21-LyzGFP的农杆菌LBA4404(OD600值0.3-O.5)侵染10-15min,共培养3d后,转化愈伤组织生长状况良好,转化率达12.5%,且在后期的生长和转化苗的再生中有良好的表现,转化苗再生率为27.5%;转化植株有较强的荧光表达量,并经PCR检测,获得的2株匍匐翦股颖PennA-1转化植株中均扩增出750bp的目标基因片断。
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