作者：薛丹丹; 郑轶琦; 王志勇; 郭海林; 陈宣; ...结缕草属植物srap标记单因子试验正交设计体系优化
摘要：以SDS法提取的结缕草属植物叶片DNA为模板，分别采用单因子试验和正交设计试验2种方法，对影响结缕草属植物SRAP—PCR的Mg^2＋、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA五个因素进行优化试验。单因子试验分别研究各因素在多水平条件下对sRAP—PCR反应体系的影响，得到最佳反应条件。正交设计采用L16（4^5）方案，综合考虑各因素间的相互作用，通过直观分析法获得各影响因素的最佳反应水平。根据4对引物对6份结缕草属植物材料扩增结果的验证比较，2种方法所获得的最佳反应体系存在一定的差异。通过综合比较和分析2种方法的优化体系扩增出的条带数、多态性条带数及多态性比率，最终建立了结缕草属植物SRAP—PCR的最佳反应体系：Mg^2＋ 2．00mmol／L、dNTP 220umol／L、引物0．20umol／L、Taq DNA聚合酶0．50U、模板DNA 60ng、2uL 10×buffer，总体积为20uL。这一优化体系的建立为今后利用SRAP标记技术进行结缕草属植物遗传多样性、种质鉴定、遗传连锁图谱及亲缘关系分析等方面的研究提供了科学的依据。
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