作者：李子博; 陈迁; 胡维新乳腺癌基因治疗腺相关病毒hsvtk基因
摘要：目的:为构建携带可调控自杀基因的重组腺相关病毒载体。方法:将含有Tet-On基因调节系统及自杀基因HSVtk的重组腺相关病毒载体pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On,与辅助质粒pAAV-RC、pHelper以磷酸钙共沉淀的方法转染HEK293细胞,进行病毒包装后得到了AAV/TRE/HSVtk/Tet-On重组腺相关病毒,以氯化铯密度梯度离心的方法对包装好的病毒进行纯化。用纯化后的重组腺相关病毒感染乳腺癌细胞株MGF- 7,用MTT法及RT-PCR检测在Dox诱导下,GCV对rAAV感染的MCF-7细胞的杀伤作用以及HSvtK基因在MCF-7细胞内的表达情况。结果在rAAV+Dox+GCV组,GCV对rAAV感染(MOI=10~4、10~5、10~6)的MCF-7细胞的杀伤作用明显高于rAAV+Dox组,并且RT-PCR结果显示经Dox诱导HSVtk表达较明显。结论:成功构建了携带可调控自杀基因的重组腺相关病毒载体,该病毒载能有效的感染乳腺癌细胞MCF-7,并能联合GCV治疗,抑制肿瘤细胞生长,从而为腺相关病毒介导的可调控自杀基因治疗乳腺癌动物实验奠定了基础。
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