一种实用的双链RNA病毒基因组克隆方法

作者：章松柏; 吴祖建; 段永平; 谢联辉; 林奇英病毒基因组克隆方法双链rnadsrna种实水稻矮缩病毒限制性内切酶virus基因组片段pcr扩增s12克隆植物氨基修饰cdna扩增产物分离鉴定序列测定基因片段逆转录t载体重组子引物

摘要：以克隆水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus，RDV)基因组片段S11、S12为例，报道一种克隆植物dsRNA病毒基因组的方法。具体过程为：利用T4RNA连接酶将5'-磷酸、3'-氨基修饰的引物Primerl连接到RDV病毒基因组第11、12片段dsRNA的3'-OH端。经逆转录、退火、补齐形成全长双链cDNA，使用单一的互补引物Primer 2进行PCR扩增，扩增产物克隆在pMD18-T载体上，对重组子进行两次限制性内切酶分析，结合序列测定分离鉴定S11、S12。结果表明，这种方法能同时克隆RDV基因片段S11、S12，是一种有效实用的dsRNA病毒基因组克隆方法。

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