作者：朱晓霞; 张露萍; 叶亚婷; 严蓉蓉; 代吕霞...原核表达融合蛋白大肠杆菌质粒构建
摘要：目的构建pET-CTR-PS重组原核表达质粒,原核表达Cholix Toxin的毒性部位和P物质的融合蛋白,为探讨该融合蛋白对肿瘤细胞的靶向杀伤作用奠定基础。方法 用PCR方法扩增Cholix Toxin的催化活性部分CTR,扩增后连入T载体构建T-CTR质粒。人工合成P物质双链寡核苷酸,将其插入pET32a中得到重组质粒pET-PS。将T-CTR和pET-PS分别经EcoRI和SacI双酶切后相接,构建得到重组质粒pET-CTR-PS。将测序正确的pET-CTR-PS重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达融合蛋白,用12%SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定重组蛋白CTR-PS的表达。结果 测序表明,CTR-PS序列与预期一致。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在18℃经0.02 mmol/L IPTG诱导20 h后,获得高效表达,Western-blot鉴定正确。结论 本研究成功构建了pET-CTR-PS原核表达重组子,并获得了可溶性高表达。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
