作者：宋填 王凤苹 米娇 李燕表皮葡萄球菌luxs基因生物膜
摘要：目的构建1个含有luxS基因上、下游片段、抗卡那霉素基因的重组克隆质粒，用以敲除表皮葡萄球菌luxS基因。方法检索GenBank获得luxS基因序列以设计引物，以生物膜阳性表皮葡萄球菌基因组DNA为模板，采用高保真PCR扩增得到包含luxS基因上游片段、完整的luxS基因和luxS基因下游片段的长片段DNA；以pEASYT4质粒为模板扩增得到抗卡那霉素基因，再用内侧引物分别扩增luxS基因上、下游序列，按luxS基因上游片段＋抗卡那霉素基因＋luxS基因下游片段的顺序重组连接，转化JMl09感受态细胞，通过卡那霉素筛选、酶切分析和PCR一测序验证luxS基因敲除的重组克隆载体。结果经酶切后电泳验证重组质粒中各目的片段插入无误，PCR检测结果证明重组质粒luxS基因缺失，测序结果显示碱基无错配，含目的基因的重组质粒菌株在含卡那霉素培养平板内正常生长，证明插入的抗卡那霉素基因表达良好。结论表皮葡萄球菌luxS基因敲除重组质粒构建成功，为后续luxS基因缺陷株的构建奠定了基础。
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