作者：杨平; 李敏惠; 苏晓庆类枯草菌素蛋白酶克隆基因组文库锅柄聚合酶链式反应
摘要：目的克隆Pythium sp．GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因。方法在已经克隆得到的Pythium sp．GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶cDN段的基础上，首先通过PCR扩增得到与其相对应的基因组DN段，然后分别通过Mini基因组DNA文库法和Panhandle PCR法扩增其上游和下游未知片段，最后通过PCR法扩增得到类枯草菌素蛋白酶基因片段。结果克隆得到1519bp Pr1蛋白酶基因序列YP1977，DNAassist软件分析其中含有一个969bp的完整的开放阅读框，编码323个氨基酸，NCBI BlastX比对结果显示，该阅读框可能编码的氨基酸序列与多个物种的Pr1蛋白酶都具有较高的同源性。结论YP1977很可能是Pythium sp．GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因的部分片段，但仍需要进一步通过构建表达系统加以验证。
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