作者：张洁茹 韦朝领茶树4300dna分析系统
摘要：简单序列重复（Simple sequence repeats,SSR）在茶树遗传与育种研究中具有重要的作用,基于4300DNA分析系统的SSR发掘具有通量高、准确和灵敏等特点,已被用于许多物种的分子标记研究,但在茶树的相关研究中尚未见报道。本研究应用单因素试验和L9（34）正交设计试验对影响茶树SSR-PCR的主要参数进行优化,建立了适合于4300 DNA分析系统的茶树SSR-PCR反应体系：1.0μL DNA（25 ng·μL^-1）,0.2μL M13F-F、0.2μL R和0.4μL IR-M13F,0.8μL dNTPs（25 mmol·L^-1）,1.0μL 10×Buffer（含Mg^2＋）,0.1μL Ex-Taq聚合酶（5 U·μL^-1）,无菌水定容至10μL。所有引物浓度均为1μmol·L^-1。同时,本研究还证明,可以以自行配制的6.5%聚丙烯酰胺凝胶溶液（acry∶bis=29∶1）替代4300 DNA分析系统指定凝胶溶液,检测SSR位点。
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