作者:李欣; 高维娟膜联蛋白a5构建重组质粒测序
摘要:目的:构建在哺乳动物细胞中表达的膜联蛋白A5(anxA5)的重组质粒。方法:Trizol法从人胎盘中抽提细胞总RNA,RT—PCR法反转录为cDNA,以cDNA为模板,扩增膜联蛋白A5的基因序列,引入酶切位点XhoI和BamHI。将真核表达载体pEGFP—N1和anxA5的PCR产物分别双酶切后用T4连接酶连接,转化大肠杆菌后抽质粒,测序鉴定。结幂:重组质粒测序后,与genebank中anxA5的mRNA进行比对,证明anxA5基因序列正确,质粒构建成功。结论:成功构建了pEGFP—anxA5重组质粒,为研究膜联蛋白A5的功能及其在细胞系中的作用奠定了基础。
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