作者：刘燕; 汪毅; 马晶晶; 史经昂; 王志勇; 刘...海雀稗srap标记正交实验体系优化引物筛选
摘要：以4个代表性海雀稗（Paspalum vaginatum）种质的叶片DNA为模板,采用L9（34）正交试验设计,对影响海雀稗SRAP-PCR反应的Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶的用量进行了优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增的影响,以确定适合海雀稗的SRAP-PCR最佳反应体系。结果表明:海雀稗SRAP-PCR最佳反应体系为10×PCR buffer 1μL、模板DNA50ng、Mg2+2.5mmol·L-1、dNTP150μmol·L-1、引物0.4μmol·L-1、TaqDNA聚合酶1.0U,总体积10μL。利用该反应体系从100对引物中筛选出可扩增清晰条带的引物83对,在83对引物中选出多态性丰富的引物44对。SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选,为今后利用SRAP标记技术进行海雀稗遗传多样性研究、基因定位、遗传图谱的构建以及分子标记辅助育种提供技术支持。
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