重组人干扰素γ慢病毒的构建及鉴定

作者：贡树基; 周伟; 张云; 张玲重组慢病毒病毒载量

摘要：目的构建含干扰素（IFN）γ基因的转移质粒,包装含IFNγ基因的重组慢病毒（LV）,测定重组LV是否包装成功,重组LV的定量及鉴定IFNγ基因的表达。方法采用分子克隆方法,构建含IFNγ基因的转移质粒,采用脂质体法将LV三质粒系统（包括鉴定正确的转移质粒p TY-CMV-IFNγ、包装质粒p SPAX2、包膜蛋白质粒p MD2.G）共转染293T细胞,包装由CMV启动子驱动的重组人LV-IFNγ。采用ELISA法对重组LV-IFNγ进行鉴定。结果成功构建了含CMV启动子的p TYCMV-IFNγ转移质粒。高效包装出重组LV-CMV-IFNγ,病毒RNA载量1.20×109copies/ml。ELISA检测LV包装病毒液中IFNγ量为：11.88μg/ml。LV原液转导293A和CEM细胞12 h后,IFNγ量分别为11.45μg/ml和10.44μg/ml。LV原液转导293A和CEM细胞72 h后,IFNγ量分别为11.28μg/ml和11.01μg/ml。结论成功包装生产出高滴度重组LV-CMV-IFNγ,转染293A和CEM后,能检测到IFNγ高水平表达,为下一步工作提供研究基础。

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