作者：颜光涛; 薛辉; 郝秀华; 李振甲抗体白介素8亲和素酶联免疫分析特异性人血浆包被纯化人工重组
摘要：建立高灵敏度和特异性的白介素8(IL-8)ELISA法.用人工重组的IL-8多次免疫兔,获取高效价抗体.纯化抗体经生物素标记,同辣根过氧化酶(HRP)标记的亲和素可特异结合.采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体.加入不同浓度标准品后,反应1.5h,洗净后再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线.该方法测定范围为0.2-10.8ng/mL,最低测出值为0.02ng/mL,批内和批间CV小于8%和10%.用该法测得18名正常人血浆中IL-8水平为0.15±0.06ng/mL.18份高低不同浓度IL-8水平的血清样品经本法和RIA测定其均值为0.54±0.35ng/mL和0.63±0.59ng/mL,相关性强(r=0.819,t=5.89).在U937细胞系体外培养液中,LPS刺激24h和48h可测出IL-8水平明显上升;而经TNF-α刺激24h和48h后同对照没有明显变化.该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足人血清和细胞培养液中IL-8水平的检测.
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