作者：高英英再灌注损伤心肌缺血蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶细胞凋亡小鼠近交系akt信号通路
摘要：目的探讨微RNA⁃29b(miR⁃29b)在心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤过程中是否发挥保护作用并探讨其可能的调控机制。方法通过100μmol/L叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导H9C2心肌细胞损伤构建I/R细胞模型;分别设立正常对照组,TBHP处理组,NC miRNA处理组,miR⁃29b类似物(mimic)处理组。通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测各组心肌细胞内miR⁃29b表达量;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK⁃8)检测各组心肌细胞的存活率;蛋白质印迹法(West⁃ern Blot)检测心肌细胞中凋亡蛋白和蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化水平的改变。另一方面,将30只C57/B6小鼠(6~7周龄)逐个编号,通过随机数字表法抽样,随机分为三组,设立I/R组、NC miRNA处理组和miR⁃29b激动剂(agomir)处理组,其中miR⁃29b agomir组小鼠预先给予miR⁃29b agomir治疗。结扎冠状动脉左前降支30 min,然后再灌注4 h建立心肌缺血再灌注动物模型。通过埃文斯蓝(Evans)和2,3,5⁃氯化三苯基四氮唑(TTC)双重染色评估三组小鼠心肌梗死面积;qPCR检测各组小鼠心肌组织内miR⁃29b表达量;蛋白质印迹法检测心肌组织内凋亡蛋白改变。结果细胞层面:与TBHP处理组相比(65±3)%,上调miR⁃29b表达可增加心肌细胞的存活率(85±3)%,下调心肌细胞凋亡蛋白表达(0.86±0.07)。进一步的蛋白质印迹法实验结果表明:与TBHP处理组(0.81±0.05)相比,上调miR⁃29b能够抑制Akt蛋白磷酸化(0.41±0.02)。动物层面:miR⁃29b agomir处理组小鼠心肌梗死面积(24±3)%与I/R组(62±2)%相比明显减少,且心肌组织凋亡蛋白表达明显减少(0.32±0.04)。结论上调miR⁃29b表达可以减少缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡。miR⁃29b可能是通过调控靶基因Akt磷酸化水平,下调心肌细胞凋亡水平,从而保护心脏。
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