作者：陈蔚; 余铃; 陈敬腾; 夏露; 郭卫春骨肉瘤维替泊芬hippo信号通路增殖迁移侵袭流式细胞术细胞迁移分析印迹法蛋白质
摘要：目的探讨维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖及迁移侵袭的的作用机制。方法体外培养骨肉瘤MG63细胞,采用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK⁃8)检测不同浓度(0、2、4、6、8、10μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞增殖影响;流式细胞术分析(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞周期分布及凋亡的影响;划痕实验和TranswellTM侵袭实验检测(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞迁移及侵袭能力的影响;蛋白质印迹法(Western Blot)检测(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对Hippo信号通路中Yes⁃相关蛋白1(YAP1)、TEA转录因子1(TEAD1)、磷酸化Yes⁃相关蛋白1(pYAP1)的蛋白表达水平。结果CCK⁃8结果显示维替泊芬能够抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖,24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(6.592±0.121)μmol/L、(4.668±0.075)μmol/L、(2.953±0.078)μmol/L,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞术结果表明维替泊芬以浓度依赖的方式诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡,使骨肉瘤MG63细胞周期阻滞于G0/G1期;划痕实验和TranswellTM侵袭实验结果表明维替泊芬可抑制MG63细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法结果显示维替泊芬处理的MG63细胞中YAP1、TEAD1蛋白表达水平降低,而pYAP1蛋白表达水平保持不变。结论维替泊芬能抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、促进细胞凋亡、导致细胞周期阻滞,以及抑制细胞迁移和侵袭,并且下调YAP1及TEAD1表达,维替泊芬阻碍YAP1和TEAD1相互作用可能是抗骨肉瘤的作用机制。
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