作者：张栋; 李苗苗; 董阳; 刘星赟; 应松成; 方...samhd1核心启动子转录起始位点转录调控
摘要：目的鉴定人不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1（SAMHD1）基因的核心启动子区域,研究SAMHD1的转录调控机制。方法从Hep G2细胞中提取基因组DNA,PCR扩增SAMHD1基因翻译起始位点上游937、667、553、399 bp片段。将扩增出的4个片段连入p MD19-T载体,双酶切鉴定后将DNA条带切胶回收,再连入p GL3-Basic载体中,双酶切及DNA测序鉴定。将包含有4个片段的荧光素酶表达载体与pRL-TK共转染Hep G2细胞,荧光素酶报告基因活性检测并分析4个片段的启动子活性。5＇RACE鉴定SAMHD1在Hep G2细胞中的转录起始位点。结果电泳结果显示已经从Hep G细胞中提取出基因组DNA。PCR扩增后电泳结果显示已经扩增出937、667、553、399 bp片段。双酶切后电泳结果显示成功将扩增出的4个片段连入p MD19-T载体。双酶切及DNA测序鉴定已成功构建荧光素酶表达载体p GL3-937、p GL3-667、p GL3-553和p GL3-399。荧光素酶报告基因活性检测显示SAMHD1核心启动子区域位于0~-399区域（ATG前一个碱基为-1）。5＇RACE结果显示SAMHD1在Hep G2细胞中转录起始位点位于-101。结论 SAMHD1的核心启动子位于翻译起始位点上游-101~-399区域,为深入研究肝细胞中SAMHD1转录调控机制奠定了基础。
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