作者：唐赟; 敬珊; 邹书珍; 冀黎骏; 杨雪; 余小...石油烃降解菌烷烃羟化酶表达功能
摘要：[目的]对一株石油烃降解菌TY22的烷烃羟化酶基因attfi克隆测序,并对其外源表达和功能进行研究.[方 法]P C R 扩增获得 aftfi基因部分序列,再根据该序列通过染色体步移技术,最终获得完整CDS序列.将 aftfi基 因 与 PET21b（ ＋ ）载体构建重组质粒,并转 入 [BL21 （DE3）进行表达.再将〇故5 基因克隆至 pCom8载体中,分别转入瓦.G E c C 3 7 （ p GEc47 AB） 和 朽 ez/tforno服^ yZz/oreseeTO K0B2A1 进行基因功能的互补试验. [结果 ]染色体步移获得了 1 26 bp 的烷烃羟化酶基因完整 C D S 序 列 （GenBank Accession KU867870）.诱导表达发现,重组菌在0.1 mmol / L I F T C、 30 ℃条件下诱导培养6 h 的表达效果最佳,得到与预期相符的46 k D a蛋 白 . 基因功能互补试验发现,重组菌能在以C12-C16为唯一碳源的培养基中生长.[结论]T Y 2 2菌株的烷烃羟化酶基因完整C D S序列全长 1 236 bp,能氧化 C12-C16的中长链烷烃,并能在大肠杆菌中有效表达.
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