作者：董丹丹; 孙燕侠; 郭华荣斑马鱼性腺组织原代细胞培养传代培养
摘要：[目的]建立斑马鱼卵巢和精巢组织的原代细胞培养技术，获得原代和传代培养细胞单层。[方法]采用组织块贴壁法进行斑马鱼卵巢和精巢组织的原代细胞培养，采用0．25％胰蛋白酶消化法进行传代培养。[结果]斑马鱼性腺组织的原代细胞培养条件为：最适培养基为DMEM／F12（pH 7．0～7．2），培养温度为24℃，在添加20 ng／mL 表皮生长因子（EGF）、20 ngm／L 碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、0．5 mmol／L β－巯基乙醇和15％胎牛血清时更有利于细胞的存活。其中，卵巢的组织块接种3～4 d后，上皮样细胞首先开始迁出，迁出的上皮样细胞生长5 d后，逐渐凋亡；此后，成纤维样细胞和另一种上皮样细胞开始大量迁出，10 d后可生长汇合成80％的原代细胞单层；可成功传代培养1次，但传代后的上皮样细胞不贴壁，很快死亡，而传代后的成纤维样细胞可贴壁生长，但基本不分裂，健康存活7 d后开始逐渐凋亡。精巢组织接种5 d后，上皮样细胞和成纤维样细胞同时开始迁出，培养16 d后逐渐凋亡，仅得到60％原代培养细胞单层。[结论]初步建立了斑马鱼性腺组织的原代细胞培养条件，并将卵巢组织块迁出的成纤维样细胞成功传代1次。
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