作者：韩洁云; 宛晓春; 邓威威茶树谷氨酸脱羧酶原核表达tlc实时荧光定量pcr
摘要：L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸（GABA）,此过程受谷氨酸脱羧酶（glutamic acid decarboxylase,GAD）催化。从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列（GenBank登录号为KT728367.1）。序列分析表明,GAD基因的ORF全长为1 482 bp,共编码493个氨基酸,该蛋白为细胞质蛋白,分子量为55.49 kDa,理论等电点为5.44。从舒茶早茶树根部中克隆该基因,并构建pMAL-c5X-GAD表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,得到分子量约为55 kDa的目的蛋白。体外酶活反应后用薄层色谱法（TLC）分析,经BAW（Butanol：Acetic acid：H_2O,4：1：2）和75%苯酚水溶液（Phenol：H_2O,3：1）2种展开剂分离酶促产物,均可检测到GABA的生成。通过实时荧光定量PCR对GAD基因在不同茶树组织的表达水平进行检测,发现GAD在根中表达量最高,而在芽中表达量最低,在其他组织中表达各不相同,其表达具有组织特异性。
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