作者：蔡艺煌; 邓小玲; 黄文霞; 黄洁; 纪晴; 许...慢病毒载体质粒构建血清反应因子口腔鳞癌细胞
摘要：目的：构建敲减人血清反应因子SRF基因的慢病毒质粒,为进一步研究SRF在口腔鳞状细胞癌中的作用提供工具.方法：利用Therimo Fisher公司RNAi网站设计出针对SR基因特异性敲减的片段,然后通过对pLKO.1载体进行双酶切,胶回收纯化后,经T4连接酶将双酶切线性化载体与设计的目的片段进行连接,转化和质粒提取,采用双酶切以及测序的方法对重组质粒进行序列鉴定.利用293T细胞对构建正确的pLKO.1-hSRF质粒进行病毒包装后感染SAS口腔鳞癌细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定株,并通过Western blot和实时荧光定量PCR对稳定转染细胞株的敲减效率进行验证.结果：构建出的慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF经测序和酶切鉴定均正确,感染该慢病毒质粒的SAS细胞后,其SRF蛋白表达量和mRNA水平与对照组相比均显著下降（P＜0.01）.结论：慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF构建成功,获得SRF低表达的SAS细胞株.
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