作者:欧阳松应; 徐寿水; 沈文律; 周传香; 李春...基因克隆抑癌基因pten基因抑制肿瘤表达载体
摘要:背景与目的:克隆人野生型和突变型PTEN的cDNA并构建其表达载体,探讨该表达质粒在人星形胶质瘤细胞U254中的表达情况。材料与方法:分别从新鲜胎盘组织和结肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增人野生型和突变型PTEN基因全长cDNA,分别克隆人pMD 18-T载体上,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸序列分析。再分别将两段基因定向克隆人pcDNA3.1(+)载体中构建表达载体,转染人U251细胞。结果:成功克隆了人野生型及突变型PTEN cDNA并成功构建其表达载体,发现突变型PTEN蛋白对细胞生长无明显抑制作用,而野生型PTEN蛋白对细胞生长有明显抑制作用。结论:FTEN可能能抑制肿瘤细胞生长,为后进一步开展PTEN对肿瘤相关功能的研究奠定基础。
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