作者：张杰; 崔红花; 张绮霞; 韩曙光; 陈晖紫单胞菌龈克隆生物牙龈素原核表达
摘要：目的克隆表达牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）牙龈素中黏附素区域的Hgp44基因，并纯化目的蛋白。方法通过聚合酶链反应（PCR）和基因重组技术，克隆得到PgATCC33277的Hgp44基因，插入到克隆载体pMD18-T中并测序鉴定。经过酶切后将目的基因片段与表达载体pET22b相连，构建出表达质粒pET22b—Hgp44。将重组质粒转化到感受态细胞BL21（DE3）中，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl—β-D—thiogalactoside，IPTG）诱导表达融合蛋白，通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹法进行分析。用固定化金属亲和层析法对重组蛋白进行分离纯化。结果目的基因片段约为1100bp，与预期大小相符，测序结果与GenBank中ATCC33277国际标准菌株的RgpA的等位基因序列U15282-致。IPTG诱导后的菌体经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后形成一个以包涵体形式存在的44000的融合蛋白。蛋白质印迹法检测证实其具有免疫原性。用镍离子金属螯合层析柱纯化出了目的蛋白，最后得到约3．5mg／L的目的蛋白。结论成功克隆表达了PgHgp44基因，并纯化出了目的蛋白。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
