作者：尹逊哲; 陈爽; 李文杰; 朱羿龙; 李一权; ...宫颈癌hela细胞凋亡素基因溶瘤腺病毒自噬凋亡
摘要：目的：探讨携带凋亡素基因（apopptin）的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响。方法：分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK（均为前期工作构建）感染HeLa细胞后,应用WST-1法检测ATV感染对HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测ATV感染对HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting法检测ATV感染对HeLa细胞自噬相关蛋白LC3、P62与mTOR表达的影响,MDC染色法检测ATV感染对HeLa细胞自噬水平的影响。结果：ATV感染后抑制HeLa细胞增殖,并具有一定的时间效应关系;以ATV 100 MOI感染72 h后抑制率达到59.26%,其抑制能力明显强于同时间段对照组（P〈0.01）。ATV感染48 h,ATV组HeLa细胞凋亡率显著高于对照组[（38.995±4.009）%vs（14.680±1.174）%,P〈0.01]。感染后的HeLa细胞,随着ATV作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组[（58.490±2.447）%vs（43.235±4.419）%,P〈0.05]。与对照组相比,ATV感染HeLa后,LC3表达量6、12 h逐渐增高,12 h达到最大值（P〈0.01）,24 h表达量最低（P〈0.01）;P62蛋白在24 h出现最高表达水平（P〈0.01）;而mTOR随着作用时间延长逐渐降低（48 h时,P〈0.01）。荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色,随着ATV作用时间延长,自噬小体明显增多;与对照组相比,6、12h自噬小体数量显著增多[（28.000±2.828）vs（8.500±2.121）,（37.000±4.243）vs（14.000±1.414）;均P〈0.01],24 h相对减少[（12.000±2.828）vs（17.000±1.414）,P〈0.01]。结论：携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。
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